NGS引物
繼qPCR技術成為分子診斷的主流技術平台後，第二代測序（NGS）技術的迅速發展給予了科學研究和醫學診斷領域更高的技術平台及更廣闊的發揮空間。作為NGS應用的重要原料組成，NGS引物和常規PCR引物相比，對於純度、定量精確度、堿基序列準確性及交叉汙染率提出了更高的要求。必威betway官方网站登录 擁有二十多年引物合成經驗，我們針對NGS應用優化產品性能和質量，並提供全麵的質量檢測。我們同樣擁有先進的NGS技術平台，能對NGS引物的交叉汙染率進行檢測。
NGS實驗流程包含樣品製備（核酸抽提/核酸製備）、文庫構建、上機測序和生物信息學分析幾個步驟。NGS相關引物主要體現在文庫構建的步驟中。其中，全基因組測序僅需要進行片段化和加接頭的文庫構建步驟，而全外顯子組測序和目標區域捕獲測序除了文庫構建的步驟還需要目標區域捕獲的步驟。
| 類型 | 名稱 | 圖示 | 一般長度 | 使用形式 | 修飾 |
|---|---|---|---|---|---|
| 通用建庫 | 1.建庫接頭引物 |  |
15~80 mer | 雙鏈（或U形） | 5’磷酸化 |
| 靶向捕獲 | 2. 多重PCR引物 |  |
18~60 mer | 單鏈多條預混 | 無 |
| 3. 雜交捕獲探針 |  |
80~120 mer | 單鏈多條預混 | Biotin，5’居多 | |
| 4. 封阻引物 |  |
-70 mer | 單鏈 | - |
我們的優勢
訂購信息
文庫構建
NGS接頭引物
NGS Adaptor Primer
必威betway官方网站登录 可完全根據客戶提供的接頭序列來進行定製化生產，磷酸化修飾的接頭通過HPLC_CE的方式純化，並且每條序列均單獨進行質譜和定量檢測。采用分批次至不同合成儀的方式最大程度避免交叉汙染。可以提供獨立單鏈、雙鏈預混（不退火）兩種不同的形式分裝。
除了完全按序列定製外，您也可以選擇生工NGS團隊預設計並常備現貨庫存的成品接頭產品線，點擊這裏查看產品列表
| 純化方式 | 堿基範圍 | 交付形態 | 包裝形式 | 額外QC | 合成周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| NGS 接頭引物單鏈 | |||||
| HPLC | 20~70 mer | 幹粉 液體 |
管裝 96孔板 |
純度（CE） | 谘詢 |
| NGS 接頭引物雙鏈預混（不退火） | |||||
| HPLC | 20~70 mer | 幹粉 液體 |
管裝 96孔板 |
純度（CE） | 谘詢 |
| NGS 接頭引物雙鏈預混(退火) | |||||
| HPLC | 20~70 mer | 幹粉 液體 |
管裝 96孔板 |
純度（CE） | 谘詢 |
NGS接頭性能展示
圖 1：建庫連接效率測試-擴增後的產物濃度
選擇三個其他品牌成品接頭，和SanNGS接頭進行對比測試。投入 10 ng 接頭連接產物，PCR循環數為8個，產物得量用Qubit檢測結果如圖。結果：生工成品接頭連接產物濃度高於同類產品。
圖 2：37°C 加速穩定性測試
37°C孵育16小時後進行瓊脂糖凝膠檢測結果。結果：在一定程度上可以證明接頭產品在短時間高溫條件下穩定。
圖 2：37°C 加速穩定性測試
圖 2：37°C 加速穩定性測試
圖 3：批次間定量差異檢測-各批次接頭OD260觀測值
選取8個不同批次的index用Nanodrop進行OD260檢查，各批次之間OD260的觀察值偏差較小，經計算CV=2.2%，遠低於5%的行業標準。結果：濃度定量批間穩定性較好。
圖 4：交叉汙染率檢測
每個季度隨機抽取4個批次，計算交叉汙染率。結果：最終檢測的2021年Q1的平均交叉汙染率是0.193‰，即交叉汙染率≤5‰。
目標區域捕獲
靶向捕獲探針
Hybrid Capture Probes
靶向捕獲探針根據DNA堿基互補原理，設計與目標捕獲區互補的DNA捕獲探針（帶biotin修飾）。在實驗過程中，先將待捕獲的基因組DNA構建標準NGS文庫，進一步使用捕獲探針與NGS文庫雜交，然後使用鏈黴素磁珠富集雜交後的DNA文庫，洗脫探針後進一步擴增純化文庫後即可上機測序。
必威betway官方网站登录 可提供兩種不同生產純化工藝的靶向捕獲探針定製，分別是 Pooling 前單條 HPLC 純化的常規合成捕獲探針和 Pooling 後 SmartPur 純化的 SmartPur NGS 靶向捕獲探針；和常規單條 HPLC 純化的捕獲探針相比，必威betway官方网站登录 獨創的 SmartPur 純化方法，結合高達768通量的合成工藝，在保證較高的捕獲效率的基礎上，最大化降低了使用成本。
您可以配套使用我們專屬開發的靶向捕獲試劑來獲得更好的捕獲效果，點擊這裏查看產品列表
| 純化方式 | 堿基範圍 | 交付形態 | 包裝形式 | 額外QC | 合成周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| SmartPur 雜交捕獲探針池（1,000 條起訂），50 pmole/條 | |||||
| SmartPur | 80~120 mer | 液體 | 管裝 | NGS驗證 | 谘詢 |
| 雜交捕獲探針單管合成*，100 pmole/條 | |||||
| HPLC HPLC_CE |
80~120 mer | 幹粉 液體 |
管裝/板裝 | 純度（CE） | 谘詢 |
對於≥1000條靶向捕獲探針的定製需求，您可以直接提供目標捕獲區域的基因名或bed文件，我們的探針設計人員將完全免費幫您進行序列設計。
定製流程
SmartPur NGS 捕獲捕獲探針定製流程圖
NGS捕獲探針性能展示
模板來自人體細胞DNA構建的illumina文庫，采用1270條探針的腫瘤Panel探針進行捕獲，Panel Size 為 118601 bp，SG為采用SmartPur純化工藝的生工定製捕獲探針；對照組為某國外頂尖品牌（代號為A），所有1270條探針序列完全一致。-1、-2為來自一次雜交的兩個樣品。
圖1：捕獲表現
圖2：覆蓋區域＞0.2X 平均覆蓋深度
圖3：覆蓋均一性和一致性表現
圖4：捕獲區間均勻性分析
在四個方麵的表現上，和國外頂尖品牌相比，生工定製捕獲探針除捕獲效率上略低外，各項指標均無明顯差距
多重PCR引物
Multiplex PCR Primers
通過多重PCR的方法來進行目標區域捕獲適合大規模的樣本和少片段/位點的富集。和雜交探針捕獲的方法比，常規情況下，多重PCR的費用也更加經濟。
| 純化方式 | 堿基範圍 | 交付形態 | 包裝形式 | 額外QC | 合成周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| 多重PCR引物單管合成 | |||||
| 不限 | 18~60 mer | 幹粉 液體 |
管裝 96孔板 384孔板 |
純度（CE） | 谘詢 |
| 多重PCR引物常規合成引物池（條數≤10,000條） | |||||
| 不限 | 18~60 mer | 幹粉 液體 |
管裝 96孔板 384孔板 |
- | 谘詢 |
封阻引物（Blocker）
Blocker Primers
NGS Blocker引物通常用於捕獲建庫過程中阻止文庫接頭的雜交，提高捕獲測序的特異性。必威betway官方网站登录 提供定製Blocker引物，並可出具包含純度、分子量等信息的檢測報告。
除了完全按序列定製外，您也可以選擇生工NGS團隊預設計並常備現貨的成品封阻引物，點擊這裏查看產品列表
| 純化方式 | 堿基範圍 | 交付形態 | 包裝形式 | 額外QC | 合成周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| HPLC | ~70 mer | 幹粉 液體 |
管裝 | 純度（CE） | 谘詢 |
訂購方式
訂購靶向捕獲Panel，可在下方“資源>文檔下載”區下載《靶向捕獲Panel訂購表》，發送郵件至ngs@sangon.com，由專業的NGS售前技術支持處理您的詢價；
訂購其他NGS引物，直接登錄引物合成網購係統，自助進行常規DNA合成的定製；
或在下方“資源>文檔下載”區下載《引物合成訂購表》，發送郵件至synth@sangon.com，由訂單中心技術人員處理您的詢價；
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