巰基修飾Oligo還原辦法
巰基修飾Oligo的形式
必威betway官方网站登录 提供兩種形式的巰基修飾形式，分別是裸露的SH和HS-SH，其中SH-Oligo為裸露的巰基，SH-Oligo在運輸或者保存過程中能夠自發的發生氧化，形成帶有二硫鍵的二聚體結構。而HS-SH-Oligo則是巰基被二硫鍵保護的形式。
這兩類巰基修飾DNA都需要在使用前進行還原處理。還原前後的結構如下圖所示：
研究化學傳感器時，SH-Oligo通常需要先還原成帶有裸露巰基的單鏈，否則其二聚體形式可能會與其他Oligo形成不需要的結構。而HS-SH-Oligo由於始終為單鏈，因此可以先與其他Oligo形成高級結構之後再進行還原。
另外，HS-SH-Oligo還原之後，會形成與Oligo等量的HO-(CH2)6-SH結構，該結構也帶有巰基，會在一定程度上通過競爭來幹預SH-Oligo與固相載體的結合。而SH-Oligo從二聚體還原成帶有裸露巰基的單鏈之後，不會產生額外的-SH，不會對SH-Oligo的結合產生競爭作用。
我們推薦使用TCEP（三-（2-甲酰乙基）膦鹽酸鹽，生工產品編號A600974）作為巰基修飾的DNA使用的還原劑，TCEP粉末可以使用純水來進行溶解。
巰基修飾Oligo的還原辦法
1.巰基修飾的DNA推薦使用TE緩衝液（10 mmol/L Tris.HCl; 1 mmol/L EDTA，生工產品編號B548106）溶解到100 μM，之後可以根據實驗需要稀釋到所需要的濃度。
2.如果用於與金電極相連，將 1 μl 的1 mM TCEP與99 μl的巰基修飾的DNA（濃度為0.2 μM）混合，室溫下還原30~60分鍾[1],還原之後的DNA可以不去除TCEP用於後續實驗。如果需要更高濃度的DNA溶液，比如100 μM，則需要使用10 mM TCEP的進行還原[2]。TCEP物質的量需要在DNA物質的量的100倍或以上。
3.如果用於與納米金連接，可將 200 μl 的15 μM的巰基修飾的DNA與 5 μl 的1 M 的TCEP混合，室溫下還原30 min。後續可以直接與納米金溶液混合[3] [4]。
替代的還原劑
DTT（二硫蘇糖醇，生工產品編號A100281）也可以用於巰基修飾的DNA的還原，但是因為含有巰基，還原之後必須除去。可以使用DTT溶液（0.1 M DTT，0.18 M PB，PH 8.0）溶解幹粉DNA到適宜的濃度，之後葡聚糖凝膠柱（比如NAP-25）進行脫鹽處理，去除DTT，之後可以用於後續實驗[5]。
注意事項
1.本公司提供的還原辦法均參考自相關文獻，不保證實際實驗效果。
2.TCEP在寬的PH範圍（1.5-9.0）均有還原作用，兩種還原劑還原後的DNA需要現用現配，不能長時間保存。
3.同時帶有亞甲基藍和巰基修飾的DNA，在還原時溶液顏色可能從藍色變成無色，此為正常情況，依然可以完成電化學信號的測定，詳見參考文獻[2]。
參考文獻
1.Zhang J, Song S, Wang L, Pan D, Fan C. A gold nanoparticle-based chronocoμlometric DNA sensor for amplified detection of DNA. Nat Protoc. 2007;2(11):2888-95. DOI: 10.1038/nprot.2007.419.
2.Xiao Y, Lai RY, Plaxco KW. Preparation of electrode-immobilized, redox-modified Oligonucleotides for electrochemical DNA and aptamer-based sensing. Nat Protoc. 2007;2(11):2875-80. DOI: 10.1038/nprot.2007.413.
3.Cordray MS, Amdahl M, Richards-Kortum RR. Gold nanoparticle aggregation for quantification of Oligonucleotides: optimization and increased dynamic range. Anal Biochem. 2012 Dec 15;431(2):99-105. DOI: 10.1016/j.ab.2012.09.013.
4.Liu J, Lu Y. Colorimetric Cu2+ detection with a ligation DNAzyme and nanoparticles. Chem Commun (Camb). 2007 Dec 14;(46):4872-4. DOI: 10.1039/B712421J.
5.Hurst SJ, Lytton-Jean AK, Mirkin CA. Maximizing DNA loading on a range of gold nanoparticle sizes. Anal Chem. 2006 Dec 15;78(24):8313-8. DOI: 10.1021/ac0613582.