體外診斷qPCR引物及探針
作為分子診斷qPCR試劑盒中的核心原料, qPCR引物及探針的質量對於樣本靶標檢測的準確性,起到了極其關鍵的作用。而對於分子診斷的應用,對引物及探針的純度、熒光強度和潔淨度等一係列指標提出更高的要求。我們在常規熒光探針的基礎上,開發了性能更好的DBQ係列雙淬滅、SF係列親水改性、SX係列熒光增強等高級熒光探針。自以qPCR技術為基礎的分子診斷應用在國內外興起開始,必威betway官方网站登录 即不斷對生產工藝進行優化升級。目前,我們生產的引物及探針,已被國內外大量的分子診斷試劑盒生產商采用。
我們的優勢
訂購信息
IVD qPCR引物
IVD qPCR Primers
包含一對正反義鏈,常規情況下不帶修飾。IVD專用的 qPCR引物全部在符合醫藥診斷級的10萬級潔淨車間生產及純化,可選擇多種純化方式,推薦專門針對IVD優化的HPLC_CE (IVD)純化。
純化方式 | 堿基範圍 | 交付形態 | 包裝形式 | 額外QC | 合成周期 |
---|---|---|---|---|---|
HPLC HPLC_CE (IVD)* | 11~59 mer | 幹粉 液體 |
管裝 96孔板 384孔板 |
純度(CE) | 3~5工作日 |
備注:
*HPLC_CE (IVD)為推薦純化方式,如需考慮成本,也可考慮ULTRAPAGE及標準HPLC純化方式,如對引物純度要求更高,則可選擇2X HPLC純化方式。選擇這些純化方式的引物均保證在符合醫藥診斷級的標準的10萬級潔淨車間內生產;
**如引物長度在堿基範圍之外,請在訂購前與技術支持進行谘詢溝通。
IVD qPCR探針
IVD qPCR Probe
通常為一條雙端分別修飾熒光和淬滅基團的單鏈DNA,其中也包含具有雙重淬滅保障的雙淬滅熒光探針。我們更是在常規熒光探針的基礎上,開發了性能更好的DBQ係列雙淬滅、SF係列親水改性、SX係列超級熒光等高級熒光探針。IVD專用的 qPCR引物全部在符合醫藥診斷級的10萬級潔淨車間生產及純化,推薦專門針對IVD優化的HPLC_CE (IVD)純化,可在保證純度的基礎上有效避免外源性汙染。
探針修飾方式及基團說明請查看IVD qPCR探針修飾基團說明
純化方式 | 堿基範圍 | 交付形態 | 包裝形式 | 額外QC | 合成周期 |
---|---|---|---|---|---|
HPLC HPLC_CE (IVD)* | 11~40 mer | 幹粉 液體 |
管裝 96孔板 384孔板 |
純度(CE) | ≤5工作日 |
備注:
*HPLC_CE (IVD)為推薦純化方式,如需考慮成本,也可考慮標準HPLC純化方式,如對引物純度要求更高,則可選擇2X HPLC。選擇這些純化方式的引物均保證按醫藥診斷級的標準在10萬級潔淨車間安排生產;
**如引物長度在堿基範圍之外,請在訂購前與技術支持進行谘詢溝通。
IVD qPCR 常規雙端修飾熒光探針
探針類型 | 淬滅修飾基團 | 熒光修飾基團 | 特點 |
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BHQ係列熒光探針 | BHQ1/BHQ2/BHQ3 | 點擊查看 IVD qPCR探針修飾基團說明 |
吸收光譜範圍廣,從430nm-730nm,通過BHQ1/BHQ2/BHQ3同係列三個淬滅基團,可搭配大多數的熒光基團,適用於多種檢測 |
MGB熒光探針 | MGB | 和傳統探針比,相同長度的序列,可增加約10°C的Tm值,並穩定探針與靶標的複合物。因此,MGB探針明顯短於傳統探針,並且具有更好的檢測特異性 | |
TAMRA熒光探針 | TAMRA | 發射光譜廣,其固有熒光產生背景信號,會潛在降低基於TAMRA檢測的靈敏度。使用TAMRA作為淬滅劑的探針通常更長(30-40 nt),不推薦在多重qPCR過程中使用 | |
Eclipse熒光探針 | Eclipse | 本底信號更低,並且Eclipse具有較寬的吸光範圍,適用於多重qPCR反應 | |
Dabcyl分子信標探針 | Dabcyl | Dabcyl由於其吸光特性且無殘留熒光,已被廣泛用作診斷探針(如分子信標)中的淬滅劑 |
常規替代增強型高級熒光探針
探針類型 | 淬滅修飾基團 | 熒光修飾基團 | 特點 |
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DBQ係列雙重淬滅探針 | DBQ1/DBQ2/DBQ3 | 點擊查看 IVD qPCR探針修飾基團說明 |
在探針中間額外修飾了一個特殊淬滅基團,和3’的淬滅基團形成雙重淬滅,能顯著降低熒光本底信號,提高熒光增量。推薦替代BHQ係列,尤其適用於較長片段的探針序列。DBQ1/DBQ2/DBQ3可部分替代BHQ係列。 |
SF係列親水改性探針 | 點擊查看 IVD qPCR探針修飾基團說明 |
SF670/SF695/SF565 | 針對原始Cy係列水溶解性差的缺點,進行了親水性改造,熒光強度得到顯著提高。SF670、SF695和SF565可替代Cy5、Cy5.5和Cy3。 |
SX係列熒光增強型探針 | SX670 | 和原始替代熒光基團相比,其熒光強度能得到倍數級的提高。目前已開發了SX670用於替代Cy5。 |
DBQ1雙淬滅探針和BHQ1常規探針對比實驗
在相同的測試條件和環境下,常規探針組均為FAM-BHQ1修飾,雙淬滅探針組均為FAM-DBQ1修飾,采用HPLC純化,此次實驗使用ABI 7500檢測qPCR,DBQ1雙淬滅探針無論是本底和熒光增量均明顯優化BHQ1
SF670熒光探針和Cy5熒光探針對比實驗
在相同的實驗條件下測試SF670與Cy5常規淬滅探針實驗對照。均采用HPLC純化,此次實驗使用ABI 7500檢測qPCR, SF670熒光探針,本底熒光比CY5低,熒光增量比CY5高
SX670熒光探針和Cy5熒光探針對比實驗
在相同的實驗條件下測試XS670與Cy5常規淬滅探針實驗對照。均采用HPLC純化,此次實驗使用ABI 7500檢測qPCR, SX670熒光探針,熒光增量比CY5極大提高
質量控製
除標準質檢外,針對於IVD qPCR應用的熒光探針,我們可以通過額外定製QC檢測來給予進一步的質量保證。
熒光值酶切增量(FLU):確保TaqMan探針、分子信標等常規雙標記引物的熒光、淬滅基團功能完全正常。
酶切增量檢測案例
對照組由於不含DNase I,雙標記探針保持完整,熒光基團被淬滅,隻檢測到本底熒光值195.1;酶切組中由於含有DNase I,雙標記探針被水解,熒光基團脫離淬滅範圍,檢測到明顯的熒光增強,熒光值達到11486.9,為本底熒光的58.9倍,符合客戶定製的質控標準。
人源汙染檢測(HSC):避免引物汙染有人gDNA。
人源汙染檢測(HSC)案例
(使用常規人源DNA對應的引物、探針,將待測Oligo作為模板,配製擴增體係,進行qPCR檢測,檢測擴增曲線及對應Ct值。A:45個反應循環內擴增曲線呈平線,係統判斷無Ct值,則說明引物探針純淨,無人源模板汙染;B:45個循環內,擴增曲線出現翹起,係統判斷出Ct值,則說明引物探針有人源基因組DNA汙染。
無模板對照檢測(NTC):杜絕陰性對照出現假陽性。
無模板對照檢測(NTC)案例
(將訂單中引物探針配製為qPCR體係,使用水作為模板,進行探針法qPCR反應,通過反應的擴增曲線及係統記錄Ct值,判斷引物探針中是否有模板汙染。A:若45個循環內,擴增曲線為平線,係統判斷無Ct值,則說明引物探針純淨,無模板汙染;B:若45個循環內,擴增曲線出現翹起,係統判斷出Ct值,則說明引物探針有模板汙染。)
訂購方式
直接登錄引物合成網購係統,自助進行常規DNA合成的定製;
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