概述

本試劑盒適用於克隆帶有3’ 末端A突出的PCR產物的克隆。如Taq DNA聚合酶、Tth DNA聚合酶等擴增的PCR產物在3’末端後都帶有一個突出的堿基A，這樣的PCR產物可以用3’末端後帶有一個突出堿基T的載體方便地進行克隆。 為了獲得快速高效的連接效果，本試劑盒采用了一種特殊的高活力Rapid Ligation Buffer，確保在短時間內可以獲得很好的連接效果。獨特連接係統允許用戶在10分鍾的時間裏完成連接反應。連接產物可以用M13通用引物和T7啟動子引物對PCR產物進行測序。pUCmT含有T7 RNA聚合酶的啟動子，可以對插入片段進行體外轉錄。

特點

• 為了獲得快速高效的連接效果，本試劑盒采用了一種特殊的高活力Rapid Ligation Buffer，確保在短時間內可以獲得很好的連接效果。獨特連接係統允許用戶在10分鍾的時間裏完成連接反應。連接產物可以用M13通用引物和T7啟動子引物對PCR產物進行測序。pUCm-T含有T7 RNA聚合酶的啟動子，可以對插入片段進行體外轉錄。

應用

帶A末端PCR產物的快速連接反應的建立

使用說明

1. PCR產物3’末端帶有突出的A堿基：Taq、Tth、AmpliTaq、KlenTaq DNA聚合酶擴增的PCR產物3’末端均帶有突出的A堿基。建議擴增的PCR產物通過瓊脂糖凝膠電泳進行回收，再進行連接轉化實驗，可以使用生工產品柱式DNA膠回收試劑盒（B518131/8132）。如果PCR擴增產物特異性很高，可直接使用生工產品柱式PCR產物純化試劑盒（B518145/8146）純化PCR產物。 2. PCR產物3’末端沒有突出的A堿基：Pfu、Pwo、Tli或DeepVent 等DNA聚合酶具有3’~5’外切酶活性，其擴增的PCR產物末端可能不帶有3’ A，要對這種平末端PCR產物進行克隆，應先對其進行3’末端加A，再進行連接轉化實驗。建議選用生工產品dA-Tailing Kit （B522291/2292）進行加Ａ實驗。 3. 自備試劑：SOC培養基、IPTG、X-gal等。