RNA (m6A) 甲基化檢測
服務簡介
RNA 甲基化是表觀遺傳學的重要內容之一, 其中m6A甲基化(N6-methyladenosine,6-甲基腺嘌呤)是較為常見的一種甲基化修飾,是指腺嘌呤的6號碳原子連接的氨基基團中的一個氫被甲基基團取代,在m6A甲基化過程中涉及到3類重要的酶:①Writers,甲基化酶,催化m6A甲基化的發生;②Erasers,去甲基化酶:去除m6A甲基化的修飾;③Readers,m6A識別蛋白,識別m6A修飾位點。m6A甲基化修飾過程是動態可逆的。已有研究證明m6A甲基化修飾在轉錄後調控中發揮作用,在調控基因表達、剪接、RNA 編輯、RNA 穩定性、控製mRNA壽命和降解、介導環狀RNA翻譯等方麵扮演重要角色,這也意味著mRNA甲基化參與了多種生物學過程,如幹細胞分化、生物節律等,在包括腫瘤、肥胖和不育等疾病的發生發展中的作用也有報道,因此對RNA m6A甲基化修飾的研究具有重要意義。
圖1. 6-甲基腺嘌呤化學結構及可逆反應過程
圖2. m6A的動態修飾及介導的生物學功能
主要流程
MeRIP-seq(mRNA甲基化測序)
MeRIP-qPCR
總RNA/mRNA m6A定量檢測(Dot Blot法)
訂購信息
服務項目 | 服務內容 | 周期 |
RNA m6A測序(MeRIP-Seq) | RNA/mRNA提取與質檢、隨機打斷、IP、建庫、NGS測序、數據處理 | 4~8周 |
RNA m6A qPCR檢測(MeRIP-qPCR) | RNA/mRNA提取與質檢、隨機打斷、IP、qPCR、數據分析 | 3~5周 |
RNA/mRNA m6A定量檢測(Dot Blot) | RNA提取與質檢、變性與交聯、封閉、抗體孵育、顯色、定量分析 | 2~3周 |
客戶提供
提供樣本
Total RNA樣本
細胞樣本
組織樣本
具體樣本要求請詳見《RNA甲基化(m6A)檢測服務訂購表》中附件:《送樣要求》。
提供信息
物種信息,單基因檢測提供目的基因
《RNA(m6A)甲基化檢測服務訂購表》最終交付
樣品質控結果、原始數據、實驗結果圖。
標準實驗報告(包括實驗流程、步驟、實驗結果及試劑耗材廠家)。
部分結果展示
圖1. 甲基化峰注釋
(利用最新的RefSeq數據庫,每個峰通過與其最鄰近基因位置關係對甲基化峰進行注釋,分成:外顯子峰,內含子峰,非翻譯區峰,基因間m6A峰。)
圖2. m6A信號區可視化
( m6A甲基化測序結果中的wig文件能夠上傳到基因組瀏覽器中,以便進行m6A信號區域的可視化。)
圖3. MeRIP-qPCR檢測各組細胞中ANPG m6A修飾水平差異。
圖4. Dot Blot檢測各組細胞中總m6A修飾水平,以亞甲基藍染色作為RNA上樣量內參。