項目介紹

近年來，菌落16S高通量測序技術為我們提供了群落的菌群結構、進化關係以及群落多樣性研究的有效手段，極大地拓寬了我們對微生物群落結構及功能的認識。但目前高通量測序分析結果往往隻有微生物分類及其相對豐度，隻表征了一個樣本中微生物類群的相對比例，不能確定不同分類水平微生物的絕對含量，當樣本間總微生物絕對含量存在差異時，可能會得出錯誤甚至相反的結論。有些學者利用通量量測序結合流式細胞儀、菌落磷脂脂肪酸含量等方法同時對群落微生物進行相對豐度與絕對定量，每種方法都有其局限性，如很多實驗室不具備流式細胞儀實驗條件，菌落中不同菌的磷脂脂肪酸含量有較大差異，Yang L（Science of the Total Environment 633, 2018）開發一種高通量絕對定量檢測方法（HAAQ），HAAQ方法的特點就是在樣品加入環境樣品沒有的帶GFP標簽大腸杆菌作為內置菌，加入前在熒光顯微鏡下計數定量，再混入樣品中參與從DNA提取、PCR、高通量測序整個過程，消除了實驗過程中的操作誤差，通過高通量的測序結果的相對豐度比例可以推算出各種菌落微生物的絕對定量；Lou J（PeerJ 6, 2018）提出了iHAAQ（Integrated High-Throughput Absolute Abundance Quantification）方法，利用與高通量測序相同的引物對DNA樣品進行qPCR絕對定量，從而獲得樣品的細菌絕對總量，再與高通量測序所得的相對豐度相乘即可獲得不同分類水平細菌的絕對含量。

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