Pull Down Assay
服務簡介
GST-pull-down
利用GST融合蛋白沉降技術，將靶蛋白與GST標簽蛋白進行融合表達，純化獲取融合表達蛋白。靶蛋白-GST融合蛋白親和固化在穀胱甘肽親和樹脂上，作為與目的反比親和的支撐物，充當誘餌蛋白，目的蛋白溶液過柱純化，即可捕獲與之相互作用的俘獲蛋白，洗脫結合物，通過SDS-page電泳分析，或聯用WB和MS檢測，可驗證蛋白間的相互作用或篩選獲取相應的目的蛋白。
RNA/DNA pull-down
Pull down是檢測RNA/DNA結合蛋白與其靶RNA/DNA之間相互作用的主要實驗手段之一。用生物素標記RNA/DNA 探針，與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA/DNA—蛋白質複合物。該複合物可與鏈親和素標記的磁珠結合，從而與孵育液中的其他成分分離。複合物洗脫後，通過Western Blot實驗檢測特定的RNA/DNA結合蛋白是否與RNA/DNA相互作用，還可以對該蛋白進行質譜（MS）鑒定蛋白質類型。
主要流程
GST-pull-down
構建GST-靶蛋白融合表達載體 WB檢測融合蛋白的表達 獲取總蛋白裂解液 GST-pull-down調取互作結合蛋白 對結合蛋白進行純化與分析
RNA/DNA pull-down
RNA/DNA生物素探針製備 細胞裂解液製備 .獲取總蛋白裂解液 pull-down調取互作結合蛋白 對結合蛋白進行純化與分析
訂購信息
服務項目 |
說明 |
周期 |
GST-pull down |
通過磁珠結合捕獲，形成複合體形式，更加靈敏和針對性獲取結合蛋白：磁珠與GST抗體孵育結合，通過與樣品裂解液孵育，形成磁珠-GST抗體-GST融合蛋白-互作結合蛋白綜合體，進而純化獲取目的結合蛋白. |
8~10周 |
RNA pull down |
需要相關文獻及客戶的要求，根據基因序列進行DNA序列T克隆，做外轉錄成RNA，再進行生物素標記，與細胞裂解液結合分離結合蛋白。 |
8周 |
DNA pull down |
可以直接合成生物素標記DNA探針，與細胞裂解液結合，磁珠法篩選分離離結合蛋白。 |
4~6周 |
GST-pull-down
客戶提供
1) 構建表達純化靶蛋白與相關誘餌蛋白（也可由公司構建）或含誘餌蛋白的細胞樣品
2) 可用於WB檢測和IP實驗的GST標簽抗體
交付
1) 原始數據、結果圖片
2) 標準實驗報告(含實驗步驟、流程及試劑耗材廠家)
RNA/DNA pull-down
客戶提供
1) 需檢測的細胞樣品
1) 目的基因信息；
2) 目的蛋白信息；
3) 一抗及其說明書
交付
1) 原始數據、結果圖片
2) 標準實驗報告(含實驗步驟、流程及試劑耗材廠家)