在線Oligo分析器說明：

① 準確性

寡核苷酸鏈的性質（如Tm值、消光係數等）是根據相關算法擬合公式推算獲得的，僅供參考，並不代表實際實驗數據。不同的工具采用的公式和參數可能不同，因此得到的結果會略有差異。如果序列中存在兼並堿基，則按照兼並堿基所代表堿基數據的平均值進行計算。

② COMPLEMENT

顯示輸入序列的反向互補序列，方向為5-3。反向互補序列自動忽視末端修飾基團，但如果修飾基團為基本堿基類似物，則按照基本堿基進行計算。脫氧次黃嘌呤(dI)的互補堿基為胞嘧啶(C)。

③ LENGTH

寡核苷酸鏈中單核苷酸殘基的數量，如果修飾基團屬於單核苷酸殘基類似物，則也算做在內。

④ GC CONTENT

寡核苷酸鏈中鳥嘌呤和胞嘧啶核苷酸的摩爾百分比。

⑤ TM

熔解溫度(Melting Temperature, Tm)是指兩段互補的堿基序列解鏈50%時的溫度。必威betway官方网站登录 引物分析器中，Tm計算是按照最近鄰二態模型進行的，所采取的計算公式(1)為：

其中，ΔH和ΔS分別指根據熱力學熔解參數計算出來的這段寡核苷酸的焓和熵，生工引物分析器采取的熱力學參數來自於Allawi和SantaLucia在1997年發表於《Biochemistry》上的文章(DOI: 10.1021/bi962590c)；R是理想氣體常數(1.987 cal/K·mole)；[Oligo]是指寡核苷酸的有效摩爾濃度，我們假定寡核苷酸鏈是非自身互補配對的，有效摩爾濃度取寡核苷酸總濃度的1/4，這裏默認的寡核苷酸總濃度為500 nM。

鹽離子校正：單價鹽離子會對引物的Tm值產生一定的影響，公式(1)中鹽濃度的條件為1M Na離子，因此得到的Tm(K)為1M鈉離子濃度下的熱力學溫度(單位：K)。但大多數實際情況下並沒有這麼高的濃度，因此需要對該濃度進行校正，生工引物分析器采用的鹽離子校正公式來自於Owczarzy在2004年發表於《Biochemistry》上的文章(DOI: 10.1021/bi034621r)。公式(2)為：

其中Tm*為離子校正後的Tm值，fGC為寡核苷酸鏈的GC含量，[Na+]為實際情況下的離子濃度，生工引物分析器中的Na離子濃度默認值為50 mM。得到Tm*之後將單位其轉換為攝氏度即為最終預測的Tm值。

⑥ MOLECULAR WEIGHT

分子量指1摩爾寡核苷酸鏈的質量，計算方式為組成寡核苷酸鏈中所有原子質量的累加。

⑦ EXTINCTION COEFFICIENT

摩爾消光係數(ε260)是指1摩爾寡核苷酸鏈水溶液在260 nm處的吸光值。該數值決定了寡核苷酸鏈質量與合成OD數的關係。組成堿基種類隨機的情況下，可以近似認為DNA雙鏈1 OD的量為50 μg，單鏈寡核苷酸1 OD的量為33 μg。但對於客戶定製的寡核苷酸鏈，需要根據序列進行計算。生工引物分析器采用最近鄰二態模型進行消光係數的計算，參考數據為Michael於2003年發表於《Nucleic Acids Research》的文章(DOI: 10.1093/nar/gnh015)。

⑧ nmole/OD260和µg/OD260

根據摩爾消光係數，可計算出每OD所含的寡核苷酸鏈的分子量以及質量，計算公式為：nmole/OD260=10⁶/ε260以及µg/OD260 = nmole/OD260 × molecular weight × 10^-3。